MiR­519d­3p ГАЛЬМУЄ ОСТЕОКЛАСТОГЕНЕЗ ЧЕРЕЗ ЗНИЖЕННЯ ЕКСПРЕСІЇ MMP2 ТА ЗСУВ СИГНАЛІНГУ В ОСТЕОБЛАСТАХ У БІК ЕКСПРЕСІЇ ОСТЕОПРОТЕГЕРИНУ

Анотація

Стан питання. Перехресна паракринна взаємодія між пухлинними клітинами та резидентними кістковими клітинами є рушієм остеокластогенезу в передметастатичній ніші в кістковій тканині. МікроРНК miR-519d-3p пов’язують із супресією матриксних металопротеїназ. Мета роботи — з’ясувати, чи miR-519d-3p остеобластів гальмує остеокластогенез через зниження експресії MMP-2 та зсув сигналінгу в остеобластах у бік експресії остеопротегерину (OPG). Матеріали та методи. Мишачі остеобласти лінії MC3T3-E1 трансфікували міметиком мікроРНК miR-519d-3p, її інгібітором або відповідними препаратами негативного контролю. Кондиційоване середовище остеобластів (КС-ОБ) змішували в рівній пропорції з кондиційованим середовищем культури пухлинних клітин MDA-MB-231 (231-КС) та вносили до первинної культури макрофагів, що походять з кісткового мозку, для подальшого виявлення тартрат-резистентної кислої фосфатази (TRAP). мРНК MMP-2 та OPG в остеобластах визначали кількісно за допомогою RT-qPCR, а також проводили дослідження за допомогою подвійного люциферазного репортерного аналізу з вектором, що містив 3¢UTR ділянку мРНК MMP-2 для порівняння взаємодії між цією ділянкою мРНК та miR-519d-3p дикого та мутантного типів. Результати. КС-ОБ клітин, трансфікованих міметиком miR-519d-3p, спричинює зменшення утворення TRAP-позитивних багатоядерних остеокластів у порівнянні з відповідними контролями. Обробка макрофагів КС-ОБ клітин, трансфікованих інгібітором miR-519d-3p, приводить до утворення порівняно більшої кількості TRAP-позитивних клітин. В остеобластах трансфекція міметиком приводить до зниження експресії мРНК MMP-2, а трансфекція інгібітором — до збільшення експресії мРНК MMP-2. У подвійному люциферазному репортерному аналізі не виявлено відтворюваної переваги miR-519d-3p дикого типу над miR-519d-3p мутантного типу щодо репресії 3¢UTR мРНК MMP-2, що свідчить або про залежну від контексту, або опосередковану регуляцію експресії MMP-2. Висновок. iR-519d-3p в остеобластах у системі in vitro асоціюється зі зниженням експресії MMP-2. Це свідчить про роль цієї мікроРНК як антиостеокластгенного паракринного фактора, що може бути використано як новий підхід для модулювання передметастатичній ніші в кістковій тканині після відповідної валідації в системі in vivo.