ВЛАСТИВОСТІ МОНОЦИТАРНИХ ДЕНДРИТНИХ КЛІТИН, НАВАНТАЖЕНИХ ЛІЗАТAМИ ПУХЛИННИХ КЛІТИН, ОБРОБЛЕНИХ ЦИТОТОКСИЧНИМИ ПЕПТИДАМИ

Анотація

Стан питання. В основу цього дослідження покладено ідею використання мембранолізу пухлинних клітин, індукованого діарилетенвмісним аналогом цитотоксичних пептидів (ЦП) — Граміцидину S, для створення нового підходу до отримання протипухлинної вакцини на основі дендритних клітин (ДК). Передбачається, що ракові клітини, які піддаються ICD, вивільняють молекулярні структури, пов’язані з пошкодженням (DAMPs), і таким чином посилюють імуногенне дозрівання та активацію ДК. Метою цього дослідження є аналіз фенотипових і функціональних характеристик генерованих моноцитарних ДК, навантажених лізатами пухлинних клітин, індукованими ЦП. Матеріали та методи. Для дослідження була використана лінія клітин потрійно негативного раку грудної залози людини MDA-MB-231. ДК були генеровані з моноцитів периферичної крові з використанням рекомбінантного гранулоцитарно-макрофагального колонієстимулюючого фактора людини (ГМ-КСФ) та інтерлейкіну-4 (ІЛ-4). Пухлинні клітини обробляли цитоксичними пептидами LMB033, що містять діарилетеновий фрагмент (фотоперемикач) у двох кільцевих формах — «закритій» з низькою активністю та токсичністю та «відкритій», що характеризується високою активністю. Отримані лізати пухлинних клітин використовували для коінкубації з ДК. Аналіз фенотипових характеристик ДК людини проводили методом проточної цитометрії з використанням моноклональних антитіл до маркерів CD83, CD86, CD11c, HLA-DR та HLA-ABC. Рівень експресії мРНК генів цитокінів та ферменту IDO визначали за допомогою кількісної ПЛР у реальному часі. Результати. Виявлено найвищу цитотоксичну дію на клітини MDA-MB-231 при використанні відкритої форми LMB033 у концентраціях 16 і 32 мкМ після 6 годин інкубації. Досліджувані ЦП навіть при нижчій із досліджуваних концентрацій за 6-годинного культивування спричиняли екстерналізацію фосфатидилсерину майже в 100% апоптичних клітин лінії MB-MDA-231. Встановлено, що навантаження ДК, генерованих з моноцитів периферичної крові in vitro, лізатом лінії пухлинних клітин MDA-MB-231, оброблених пептидом LMB033 у відкритій або закритій формах, викликає різноспрямований вплив на антиген-презентуючі властивості клітин залежно від форми пептиду. Порівняно з ДК, завантаженим необробленим лізатом, виявлено статистично значуще збільшення кількості зрілих, активованих CD83+ ДК під впливом лізатів, оброблених відкритою та закритою формами LMB033 у концентрації 16 мкМ та відкритою формою ЦП у концентрації 32 мкМ. Отримані результати свідчать про успішне дозрівання та активацію ДК під впливом лізатів MDA- MB-231, оброблених відкритою та закритою формами LMB033 in vitro. Статистично значущих змін рівнів експресії мРНК Th  поляризуючих цитокінів TNF-α, IL-12 під впливом ЦП-індукованих лізатів клітин MDA-MB-231 не виявлено. При цьому активація транскрипції генів імуносупресивних цитокінів та IL-10, TGF-β і ферменту IDO також не відбулася, що свідчить про відсутність активації імуносупресивних властивостей генерованих ДК. Висновок. Представлені дані відкривають перспективу для створення ефективної протипухлинної імунотерапевтичної вакцини на основі ДК з використанням ЦП LMB033.