ШВИДКИЙ ТА ДЕШЕВИЙ СПОСІБ ВИЯВЛЕННЯ МУТАЦІЇ 2-го ТИПУ ГЕНА CALR ЗА ДОПОМОГОЮ АЛЕЛЬ-СПЕЦИФІЧНОЇ ЗТ-ПЛР ДЛЯ ДІАГНОСТИКИ МІЄЛОПРОЛІФЕРАТИВНИХ НОВОУТВОРЕНЬ
DOI:
https://doi.org/10.32471/exp-oncology.2312-8852.vol-44-no-1.17329Ключові слова:
CALR (кальретикулін), есенціальна тромбоцитемія (ЕТ), алельспецифічна ПЛР, мієлопроліферативні новоутворення, мутація.Анотація
Близько 15–24% випадків есенціальної тромбоцитемії (ЕТ) і 25–35% випадків первинного мієлофіброзу (ПМФ) характеризуються наявністю мутації в гені кальретикуліну (CALR). Секвенування за Сенгером, кількісна полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР), аналіз плавлення ДНК з високою роздільною здатністю (high resolution melt — HRM) або повногеномне секвенування наступного покоління (next generation sequencing — NGS), які зазвичай використовуються для виявлення цих мутацій, є дорогими та вимагають високовартісного обладнання. Однак, мутацію CALR 1-го типу можна виявити за допомогою ПЛР та електрофорезу в агарозному гелі. Мета: Використання алель-специфічної ПЛР зі зворотною транскрипцією для швидкого та недорогого виявлення мутації 2-го типу в гені CALR. Матеріали та методи: Алельспецифічні праймери, призначені для виявлення мутації 2-го типу (вставка 5-bp; c.1154_1155 ins TTGTC) гена CALR були використані для алельспецифічного аналізу методом ПЛР зі зворотною транскрипцією кДНК пацієнта з мієлопроліферативним новоутворенням, у якого не було виявлено мутацій в генах JAK2 та MPL і визначено мутацію гена CALR секвенуванням за Сенгером. Зразки методом ПЛР зі зворотною транскрипцією аналізували електрофорезом у агарозному гелі. Результати: Для аналізу використано випадок з JAK2- та MPL-негативною ЕТ. Мутацію 2-го типу (K385fs*47 ins5) було виявлено секвенуванням за Сенгером. Цю кДНК повторно аналізували за допомогою алель-специфічної ПЛР зі зворотною транскрипцією. Нормальний алель та алель з мутацією 2-го типу гена CALR виявляли за допомогою гель-електрофорезу. Отримані результати повністю узгоджуються з даними, отриманими за допомогою секвенування за Сенгером. Виявлення мутації 2-го типу (K385fs*47 ins5) остаточно підтвердило діагноз «есенціальна тромбоцитемія» згідно з сучасними критеріями ВООЗ. Висновки: Алель-специфічний аналіз ПЛР зі зворотною транскрипцією може бути використано для швидкого та недорогого виявлення основної мутації 2-го типу (ins 5) гена CALR у пацієнтів з мієлопроліферативними новоутвореннями.
Посилання
Verstovsek S, Tefferi A. Myeloproliferative Neoplasms: Biology and Therapy (Contemporary Hematology). Humana Press, 2011. 230 p. ISBN: 978-1-60761-266-7
Swerdlow SH, Campo E, Harris NL, et al. WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissue (IARC WHO Classification of Tumours), Fourth Edition. Lyon: IARC Press, 2008. 439 p. ISBN-13 9789283244943
Arber DA, Orazi A, Hasserjian R, et al. The 2016 revision to the World Health Organization classification of myeloid neoplasms and acute leukemia. Blood 2016; 127: 2391–405. https://doi.org/10.1182/blood-2016-03-643544
Finazzi G, Harrison C. Essential thrombocythemia. Semin Hematol 2005; 42: 230–8. https://doi.org/10.1053/j.seminhematol.2005.05.022
Baxter EJ, Scott LM, Campbell PJ, et al. Acquired mutation of the tyrosine kinase JAK2 in human myeloproliferative disorders. Lancet 2005; 365: 1054–61. https://doi.org/10.1016/s0140-6736(05)71142-9
Levine RL, Wadleigh M, Cools J, et al. Activating mutation in the tyrosine kinase JAK2 in polycythemia vera, essential thrombocythemia, and myeloid metaplasia with myelofibrosis. Cancer Cell 2005; 7: 387–97. https://doi.org/10.1016/j.ccr.2005.03.023
Pardanani A, Levine R, Lasho T, et al. MPL515 mutations in myeloproliferative and other myeloid disorders: a study of 1182 patients. Blood 2006; 108: 3472–6. https://doi.org/10.1182/blood-2006-04-018879
Klampfl T, Gisslinger H, Harutyunyan AS, et al. Somatic mutations of calreticulin in myeloproliferative neoplasms. N Engl J Med 2013; 369: 2379–90. https://doi.org/10.1056/nejmoa1311347
Nangalia J, Massie CE, Baxter EJ, et al. Somatic CALR mutations in myeloproliferative neoplasms with nonmutated JAK2. N Engl J Med 2013; 369: 2391–405. https://doi.org/10.1056/nejmoa1312542
Tefferi A, Barbui B. Polycythemia vera and essential thrombocythemia: 2019 update on diagnosis, risk-stratification and management. Am J Hematol 2019; 94: 133–43. https://doi.org/10.1002/ajh.25303
Jones AV, Ward D, Lyon M, et al. Evaluation of methods to detect CALR mutations in myeloproliferative neoplasms. Leukemia 2015; 39: 82–7. https://doi.org/10.1016/j.leukres.2014.11.019
Cabagnols X, Defour JP, Ugo V, et al. Differential association of calreticulin type 1 and type 2 mutations with myelofibrosis and essential thrombocytemia: relevance for disease evolution. Leukemia 2015; 29: 249–52. https://doi.org/10.1038/leu.2014.270
Zinke M, Nageswaran V, Reinhardt R, et al. Rapid and sensitive detection of calreticulin type 1 and 2 mutations by real-time quantitative PCR Mol Diagn Ther 2015; 19: 329–34. https://doi.org/10.1007/s40291-015-0162-3
Dybkov MV, Gartovska IR, Maliuta SS, et al. Detection of V617F mutation of gene jak2 at patients with chronic myeloproliferative neoplasms. Biopolym Cell 2010; 26: 214–7. http://dx.doi.org/10.7124/bc.000159
Gluzman DF, Sklyarenko LM, Zavelevich MP, et al. Complex diagnosis of myeloid neoplasms in regional oncological centers. Science and Innovation (Nauka Innov) 2013; 9: 61–72. http://dx.doi.org/10.15407/scin9.06.061
Gluzman DF, Sklyarenko LM, Telegeev GD, et al. Dia¬gnostics of acute leukemia and myeloproliferative neoplasms Scientific-practical guide. Kyiv: DIA, 2016. 124 p (in Russian). ISBN 978-617-7015-40-5
##submission.downloads##
Опубліковано
Як цитувати
Номер
Розділ
Ліцензія
Авторське право (c) 2023 Експериментальна онкологія
Ця робота ліцензується відповідно до Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License.
