ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ЭКСПРЕССИИ S6K1 И S6K2 В ОПУХОЛЯХ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ЧЕЛОВЕКА

Савинская Л.O., Лизогубов В.В., Усенко В.С., Овчаренко Г.В., Горбенко O.Н., Роднин М.В., Вудмаска M.И., Погребной П.В., Киямова Р.Г., Панасюк Г.Г., Немазаный И.O., Малец M.С., Пальчевский С.С., Гут И.T., Филоненко В.В.

Summary. Цель: экспрессировать рекомбинантную S6K2 в бакуловирусной системе; выделить препаративные количества гомогенного белка для биохимических исследований; получить и охарактеризовать специфические моноклональные антитела против рекомбинантной S6K2; изучить экспрессию и внутриклеточную локализацию S6K1 и K2 в злокачественных и доброкачественных опухолях молочной железы по сравнению с аналогичными нормальными тканями. Методы: рекомбинантный бакуловирусный вектор, экспрессирующий S6K2 дикого типа, создан с помощью Bac-to-Bac системы (Invitrogen); рекомбинантная S6K2 была очищена из инфицированных Sf9 клеток методом афинной хроматографии; получены моноклональные антитела против рекомбинантной S6K2; специфичность полученных антител в реакции с рекомбинантной и эндогенной S6K2 изучена методами ELISA, Вестерн-блоттинга, иммунопреципитации и иммуногистохимического окрашивания; для иммуногистохимического определения S6K1 и S6K2 в нормальных и опухолевых тканях молочной железы использовали моноклональные антитела против S6K1 и K2. Результаты: препаративные количества ферментативно активной S6K2 получали с использованием бакуловирусной экспрессирующей системы; для получения и характеристики моноклональных антител применяли высокогомогенные препараты S6K2; в опухолях молочной железы выявлен повышенный уровень экспрессии S6K1 и S6K2 по сравнению с таковым в аналогичных нормальных тканях; S6K2 часто локализовалась в ядрах аденокарцином, но редко в фиброаденомах и нормальных тканях молочной железы. Вывод: получение препаративных количеств рекомбинантной S6K2 и создание специфических моноклональных антител к S6K2 — эффективный способ изучения функции и регуляции этой важной сигнальной молекулы в нормальных и опухолевых клетках. Иммуногистохимичекий анализ экспрессии S6K1 и K2 в нормальных тканях и злокачественных опухолях молочной железы подтверждает их повышенную экспрессию в последних. Накопление S6K2 в ядрах раковых клеток может быть связано с нарушением ядерно-цитоплазматических перемещений, а следовательно, может нарушать клеточный рост и пролиферацию.

No Comments » Add comments
Leave a comment

ERROR: si-captcha.php plugin says GD image support not detected in PHP!

Contact your web host and ask them why GD image support is not enabled for PHP.

ERROR: si-captcha.php plugin says imagepng function not detected in PHP!

Contact your web host and ask them why imagepng function is not enabled for PHP.